交泰丸对利血平诱导小鼠抑郁模型的影响

交泰丸组方首见于《韩氏医通》，由黄连、肉桂两味药物组成，配伍比例（10:1）。方中黄连生用且用量较大，为君药，入心经，大苦大寒，意在清心降火除烦，肉桂用量为黄连的十分之一，入肾经，辛甘大热，其意在制约黄连的苦寒，引火归元，化气生津，又不助火。黄连、肉桂配伍具有交通心肾，镇静安神的功效，主要治疗怔忡不宁，夜寐不安等症状。小檗碱、药根碱、巴马亭等是黄连的主要成分，有关研究显示，小檗碱发挥抗抑郁作用是通过调节NOcGMP-PKG信号转导通路来实现的。桂皮醛和肉桂酸等是肉桂主要成分，其中桂皮醛具有明显的镇静催眠作用。本研究选择交泰丸组方中黄连、肉桂（配伍比例为10:1）作为研究对象。观察利血平诱导小鼠眼睑和体温的变化，以及小鼠海马和皮质组织中的单胺类神经递质[去甲肾上腺素（NE）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）]含量的变化，来揭示交泰丸抗抑郁的作用机制。

1 材料与方法
 

1.1 实验器材

开场行为观察箱（自制），Digibehave双画面动物行为视频分析系统2.1版（上海吉量软件科技有限公司），数字式电子体温计（山东东阿阿胶阿华医疗器械有限公司），小鼠灌胃器，Agilent1100高效液相色谱系统(美国Agilent公司），DECADEⅡ电化学检测器（荷兰Antec Leyden公司），电子超声匀浆器（美国Untrasound Technology公司），冷冻离心机（法国Heraeus公司），进样针（瑞士Hamilton公司）ULTRA LOW超低温冰箱（日本SANYO公司）等。

1.2 实验药品

交泰丸组方（制备工艺：按处方比例分别称取黄连0.2 kg和肉桂0.02 kg，均制成20目粗粉，分别加水提取3次，黄连采用回流提取法，肉桂采用索氏提取法，加水量依次为10、8、8倍，浸0.5 h，提取170、80、40 min，滤过，水浴浓缩备用）；盐酸氟西汀(百优解，美国礼来公司，批号：1798A)，购自天津中医药大学第一附属医院药房。阳性对照药为盐酸氟西汀（0.015 g/kg），实验药为交泰丸组方低、中、高剂量（1.5、3、6 g生药/kg），全部药物使用之前用超纯水配制成溶液或混悬液，需超声溶解。利血平注射液（1 g/L，天津金耀氨基酸有限公司，批号：1005281）。

1.3 实验动物

健康ICR小鼠，雄性，体质量18~22g，由北京维通利华动物实验中心提供，合格证编号：SCXK（京）2012-0001。饲养于天津中医药大学实验动物中心，实验期间保持自由饮水和进食，饲养环境温度为（24±1）℃，湿度为（55%±5%），适应性喂养7 d后进行实验。

1.4 实验方法 

1.4.1 实验分组和给药

将小鼠按随机数字表法随机分为6组，每组10只，分别为空白组、模型组、阳性药组（盐酸氟西汀0.015 g/kg）及交泰丸组方低、中、高剂量组（1.5、3、6 g生药/kg）。各实验组按照0.01 mL/g给小鼠灌胃，连续7 d。末次灌胃给药1 h后，模型组及各给药组立即腹腔注射用生理盐水配制的2.5 mg/kg利血平溶液，0.01 mL/g，空白组腹腔注射等量生理盐水。

1.4.2 小鼠强迫游泳实验（FST）

按照Porsolt RD描述，经Xu稍加修改的方法，给药1 h后进行实验，将每只小鼠置于装有高度为15 cm水（25±1）℃的有机玻璃缸（高20 cm，直径10 cm）中，使用动物行为视频分析系统，记录6 min内小鼠强迫游泳的行为，分析后4 min内小鼠累计不动时间（s），每次操作1只。小鼠在水中呈漂浮状态，停止挣扎，只有细小的肢体运动以保持头部浮在水面上为不动时间。

1.4.3 小鼠悬尾实验（TST）

按照Steru所描述的方法，每只小鼠给药1 h后进行实验，将小鼠距尾尖1 cm处倒置悬挂，使用动物行为视频分析系统记录6 min内小鼠的绝望行为，分析后4 min内的累计不动时间（s），每次操作1只。小鼠呈倒悬垂状态，停止挣扎，静止不动为不动时间。

1.4.4 小鼠开场实验（OFT）

为确认FST和TST的不动时间是否与小鼠自发活动有关，笔者采用开场实验进行验证。每只小鼠在给药1 h后，置于暗箱（50 cm×50 cm×40 cm，内壁为黑色，用白线将底部平均分成25格）中央，使用动物行为视频分析系统记录4 min内小鼠的自主活动行为，分析后3 min内小鼠穿越横格数量和后腿直立次数，每次测试后及时清理动物排泄物。

1.4.5 小鼠利血平拮抗实验

参照Bourin所描述的方法，注射利血平1 h后，观察小鼠眼睑下垂的情况。将小鼠置于和测试者视线水平高度一致的平面上，按照Sánchez-Mateo报道的评分方法进行观察并打分，即眼睑全部睁开：0分；3/4睁开：1分；1/2睁开：2分；1/4睁开：3分；不能睁开：4分。注射利血平2 h后，将数字式电子体温计插入小鼠肛门内约1.5 cm处，记录各组小鼠体温。测定时环境温度保持在（24±1）℃范围内，噪音小于40 dB。

1.4.6 小鼠脑组织样品制备及检测